耐氟喹諾酮牛支原體探針法實時定量PCR試劑盒

探針法耐氟喹諾酮牛支原體實時定量pcr試劑盒
probe-quantitative real-time pcr kit for fluoroquinolone-resistant mycoplasma bovis
貨號：mqt-abo-20 規格：20個反應
貨號：mqt-abo-50 規格：50個反應
貨號：mqt-abo-100 規格：100個反應
儲存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反復凍融。
試劑盒特點：
使用單核苷酸多態性pcr檢測牛支原體喹諾酮抗性，檢測單堿基突變。 使用的dna聚合酶具有抗抑制能力強和熱穩定性好的特點；采用熱啟動方式，可抑制非特異性擴增，降低背景熒光。 帶有陽性對照樣品（組分c），可用于檢驗試劑盒有效性。 帶有udg酶和dutp，可降低殘留dna的污染。 靈敏度高，檢測極限相當于反應液中約含5個基因組。
牛支原體（mycoplasma bovis）是最重要的致病性牛寄生支原體，呈全球流行趨勢，可引起肺炎、關節炎、乳腺炎、中耳炎、結膜炎、生殖紊亂和流產等多種疾病，發病率達到60%-100%。在健康或患病的牛身上均可發現牛支原體，其疾病表現和對治療和疫苗的反應常發生變化，診斷和控制較為困難，因此其流行程度常被低估。牛支原體引起的疾病常呈慢性發展，引起動物身體虛弱，抗生素療效不明顯，因此常引起難以估測的經濟損失。由于缺乏有效的牛支原體疫苗，抗生素是最主要的控制手段。
氟喹諾酮是一類廣譜而且高效的抗生素，常被用于治療牛支原體感染。氟喹諾酮通過抑制dna復制達到抗菌的目的，其抗性則是源于細菌的dna螺旋酶和dna拓撲異構酶iv發生突變，導致藥物結合能力下降。突變點位于dna螺旋酶的gyra和gyrb亞基，和/或dna拓撲異構酶iv 的parc和pare 亞基，這些區域統稱為喹諾酮抗性決定區域（qrdr）。體內獲得的喹諾酮抗性突變只存在于parc基因。
對氟喹諾酮抗性的檢測，通常做法是用體外分離培養的菌落做敏感性測試，需要花費很長的時間，有時需3-4周才能得到結果。pcr法檢測時間短，僅需幾個小時即可獲得結果，還具有高靈敏度和高特異性的特點，因此是更好的選擇。定量pcr法與普通pcr法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環境污染的影響。
本試劑盒采用雙重探針法，既可以檢測牛支原體，也可以同時檢測抗性菌株。選擇parc基因作為靶點，對牛支原體喹諾酮抗性菌株進行單堿基多態性pcr鑒定。在牛支原體parc基因的265位點，堿基g突變為a導致一個天冬氨酸突變為天冬酰胺，賦予支原體喹諾酮抗性。在下游間隔一個堿基的267位點，一些菌株帶有t突變為c的無效突變。本試劑盒通過鑒別265位點的突變來檢測菌株的喹諾酮抗性。經blast驗證，與其他生物的基因組無交叉反應。通過檢測23種支原體和8種常見細菌，未見假陽性結果，而150個牛支原體菌株均得到了陽性信號，可見本試劑盒具有非常好的特異性。
本試劑盒包含熱啟動dna聚合酶、dntp（以dutp代替dttp）、引物、探針、陽性對照品、rox染料，和用以防止殘余dna污染的udg（uracil-dnaglycosylase，尿嘧啶-dna-糖基酶），用戶只需準備好dna樣品即可使用。
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