*液相色譜方法-*通恒(在線咨詢)-河北*液相色譜
視頻作者：北京*通恒科技有限公司
hplc概述
*液相色譜法(hplc)是上個(gè)世紀(jì)七十年代迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)*、快速的分析分離技術(shù)，河北*液相色譜，是現(xiàn)代分離測(cè)試的重要手段。
色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
hplc是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，其以液體作為流動(dòng)相，并采用顆粒*細(xì)的*固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同，但填料更加精細(xì)，*液相色譜哪家便宜，需高壓泵推動(dòng)，柱效高，分析速度快。
與氣相色譜不同的是液相色譜中流動(dòng)相亦參與組分的分離過(guò)程，其組成、比例和ph值可靈活調(diào)節(jié)，分離模式多樣。在實(shí)際操作中主要通過(guò)改變流動(dòng)相的組成來(lái)調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性，從而使不同樣品得到分離。
*液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛，*液相色譜價(jià)格，對(duì)樣品的適用性廣，不受分析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、*性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用*液相色譜法分析測(cè)定，因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中，可用氣相色譜分析的約占20% ，而80% 則需用*液相色譜來(lái)分析。
*液相色譜儀-色譜柱的使用和*
色譜柱是*液相色譜儀主要的部件，被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修*，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
1、使用預(yù)柱和保護(hù)柱。
預(yù)柱(pre-column)安裝于泵和進(jìn)樣器之間，它給色譜柱中的流動(dòng)相提供了完全的平衡，并防止了對(duì)柱填料有*作用的組分或污染物進(jìn)入色譜柱。保護(hù)柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進(jìn)入色譜柱，保護(hù)柱應(yīng)與色譜柱的填料相同。預(yù)柱和保護(hù)柱可以經(jīng)常更換，而不需要經(jīng)常更換色譜柱，這就延長(zhǎng)了色譜柱的使用壽命。
2、防止氣體進(jìn)入色譜柱。
有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進(jìn)入的，否則將會(huì)使柱效降低甚至形成微小的難以驅(qū)除的氣室。因此，為了防止氣泡進(jìn)入色譜柱，一定要使用經(jīng)過(guò)脫氣的流動(dòng)相，并且要嚴(yán)格按照下列步驟來(lái)安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進(jìn)入；c.如無(wú)溶劑滲出時(shí)，表明色譜柱的此端已經(jīng)進(jìn)去空氣了，此時(shí)，可將色譜柱的出口端接到進(jìn)樣閥上，以流動(dòng)相來(lái)反方向沖洗色譜柱，以便將柱內(nèi)的空氣排除。以0.2ml/min的小流量來(lái)沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會(huì)導(dǎo)致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說(shuō)明柱內(nèi)的氣體已經(jīng)被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進(jìn)不到色譜柱里面了。
3、色譜柱的清洗。
為了不使被測(cè)物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之后，都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱。
4、色譜柱的存放。
*液相色譜的歷史
1903年俄國(guó)植物化學(xué)家茨維特（tswett）初次提出“色譜法”（chromatography）和“色譜圖”（chromatogram）的概念。茨維特使用色譜法 chromatography （來(lái)自希臘字， chroma 意思是顏色， graphy 意思是記錄 - 直譯為顏色記錄）來(lái)描述他的彩色試驗(yàn)。（令人好奇的是， 俄羅斯名字茨維特意思是顏色。）1930年以后，相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術(shù)。1952年，英國(guó)學(xué)者martin和synge 基于他們?cè)诜峙渖V方面的研究工作，提出了關(guān)于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術(shù)向前推進(jìn)了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。1958年，*液相色譜方法，基于moore和stein的工作，離子交換色譜的儀器化導(dǎo)致了氨基酸分析儀的出現(xiàn)，這是近代液相色譜的一個(gè)重要嘗試，但分離效率尚不理想。1960年中后期，氣相色譜理論和實(shí)踐發(fā)展，以及機(jī)械、光學(xué)、電子等技術(shù)上的進(jìn)步，液相色譜又開(kāi)始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了hplc。1970年中期以后，微處理機(jī)技術(shù)用于液相色譜，進(jìn)一步提高了儀器的自動(dòng)化水平和分析精度。1990年以后，生物工程和生命科學(xué)在國(guó)際和國(guó)內(nèi)的迅速發(fā)展，為*液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，如人類*組計(jì)劃，蛋白質(zhì)組學(xué)有hplc作預(yù)分離等。
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