百螢 Annexin V-Cy5標記適用于哪些儀器

一、百螢 annexin v-cy5標記簡介和工作原理
細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定和一些疾病發生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細胞中，磷脂酰絲酸（ps）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲酸（ps）由脂膜內側翻向外側。在體內，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的ps 從而將這些程序性死亡的細胞，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。 annexinⅴ是一種分子量為35-36kd的ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的ps高親和力特異性結合。ps 外翻發生在細胞核破裂，dna 片段化以及凋亡相關蛋白出現之前，這使得annexin v 與ps 的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。
二、百螢 annexin v-cy5標記實驗方案及適用儀器分析
實驗方案
概述
用測試化合物（200μl/樣品）制備細胞
添加annexin v結合物測定溶液
室溫孵育30-60分鐘
用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析
1.用膜聯蛋白v綴合物制備和孵育細胞：
1.1制備膜聯蛋白v結合測定緩沖液：10mm hepes，140mm l和2.5mm cacl2，ph 7.4。
1.2用測試化合物處理細胞一段所需的時間（用星形孢菌素處理的jurkat細胞4-6小時）以誘導細胞凋亡。
1.3離心細胞，得到1-5×105個細胞/管。
1.4將細胞重懸于200μl膜聯蛋白v結合測定緩沖液中（來自步驟1.1）。
1.5在細胞中加入2μl膜聯蛋白v結合物。
可選：在細胞內加入死細胞染色劑如碘化丙錠，用于壞死細胞。
1.6在室溫下孵育30至60分鐘，避光。
1.7在用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前，加入300μl膜聯蛋白v結合測定緩沖液（來自步驟1.1）以增加體積（參見下面的步驟1.8）。
1.8使用流式細胞儀或熒光顯微鏡監測熒光強度（參見下面的步驟2或3）。
適用儀器分析
2.使用流式細胞儀分析：
通過使用具有適當過濾器的流式細胞儀來量化膜聯蛋白v綴合物。
注意：粘附細胞上的膜聯蛋白v結合流式細胞術分析未經常檢測，因為在細胞分離或收獲期間可能發生特定的膜損傷。 然而，casiola-rosen等人先前報道了利用膜聯蛋白v對貼壁細胞類型進行流式細胞術的方法。 和van engelend等人（見參考文獻1和2）。
3.使用熒光顯微鏡分析：
3.1移取步驟1.6的細胞懸液，用膜聯蛋白v結合測定緩沖液（來自步驟1.1）沖洗1-2次，然后用膜聯蛋白v結合測定緩沖液（來自步驟1.1）重懸細胞。 將細胞添加到蓋有玻璃蓋玻片的載玻片上。
注意：對于粘附細胞，建議直接在蓋玻片上生長細胞。 與膜聯蛋白v綴合物孵育（步驟1.6）后，用膜聯蛋白v結合測定緩沖液（來自步驟1.1）沖洗1-2次，并將膜聯蛋白v結合測定緩沖液（來自步驟1.1）加回到蓋玻片中。 在玻璃載玻片上翻轉蓋玻片并觀察細胞。 在與膜聯蛋白v綴合物孵育后，細胞也可以在2％甲醛中固定，并在顯微鏡下觀察。
3.2在熒光顯微鏡下用適當的濾光片分析膜聯蛋白v綴合物的凋亡細胞
西安百螢生物科技有限公司專注于試劑,試劑盒,實驗室耗材等