定量反轉(zhuǎn)錄*盒-武漢友名生物
原位pcr儀
它是由主機(jī)，加熱模塊，玻片，定量反轉(zhuǎn)錄*盒，熱蓋，控制軟件組成。主要是應(yīng)用對細(xì)胞或組織內(nèi)的dna部分片段進(jìn)行原位擴(kuò)增分析-即定位分析，如病源*在細(xì)胞的位置或目的*在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等。是保持細(xì)胞或組織的完整性，使pcr反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞的靶dna所在的位置上進(jìn)行*擴(kuò)增，不但可以檢測到靶dna，又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置，于分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實用價值。它無需將細(xì)胞*碎提取dna，細(xì)胞內(nèi)有dna酶的作用擴(kuò)增受到一定的影響，使用不是很普遍。
該儀器主要應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床研究，如*細(xì)胞等。
隨機(jī)引物擴(kuò)增技術(shù)(arbitrary primedpcr， ap- pcr)
ap-pcr技術(shù)通過隨意設(shè)計或選擇一個非特異性引物.在pcr反應(yīng)體系中.首先在不嚴(yán)格條件下使引物與模板中許多序列通過錯配而復(fù)性。如果在兩條單鏈上相距一定距離有反向復(fù)性引物存在，則可經(jīng)taq酶的作用使引物延伸而發(fā)生dna部分片段的擴(kuò)增。經(jīng)一至數(shù)輪不嚴(yán)格條件下的pcr循環(huán)后，再于嚴(yán)格條件下進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)dna測序凝膠電泳分離后.經(jīng)放1射性自顯影或熒光顯示即可得到dna*圖。ap-pcr用于腫1瘤的**、**的分離;菌1種、菌株及不同物種的鑒定;遺傳作圖;不同分化程度或某些不同狀態(tài)下的組織的*表達(dá)差異等方面的研究。
pcr的創(chuàng)建
khorana (1971)等*早提出核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想：“經(jīng)dna變性，與合適的引物雜交，用dna聚合酶延伸引物，并不斷重復(fù)該過程便可合成trna*?！钡捎诋?dāng)時*序列分析方法尚未成熟，熱穩(wěn)定dna聚合酶尚未報道以及引物合成的困難，這種想法似乎沒有實際意義。加上分子克1隆技術(shù)的出現(xiàn)提供了一種克1隆和擴(kuò)增*的途徑，所以khorana的設(shè)想被人們遺忘了。
1983年4月的一個星期五晚上，他開車去鄉(xiāng)下別墅的路上，猛然閃現(xiàn)出“多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”的想法。
1983年12月，mullis用同位素標(biāo)記法看到了10個循環(huán)后的49 bp長度的第yi個pcr片段；
1985年，kary mullis在cetus公司工作期間，發(fā)明了pcr。mullis要合成dna引物來進(jìn)行測序工作，卻常為沒有足夠多的模板dna而煩惱。
1985年10月25日申請了pcr的專1利，
1987年7月28日批準(zhǔn)（專1利號4，683，202 ），mullis是第yi個發(fā)明人；
1985年12月20日在science雜志上發(fā)表了第yi篇pcr的學(xué)術(shù)論1文，mullis是共同作者；
1986年5月，mullis在冷泉港實驗室做專題報告，全世界從此開始學(xué)習(xí)pcr的方法。
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