PCR 緩沖液-友名生物公司

hot start pcr的原理
hot start pcr法是提高pcr特異性的重要方法之一。這種方法可以防止在pcr反應(yīng)第yi步驟因引物的錯(cuò)配或引物二聚體的形成而導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增，從而可以提高目的dna部分片段的擴(kuò)增效率。takara taq hot start version，takara ex taq hot start version，takara la taq hot start version，primestar hs dna polymerase，mightyamp dna polymerase是*1體和dna聚合酶的混合制品。*1體在高溫加熱前與聚合酶相結(jié)合，*聚合酶的活性。在pcr反應(yīng)*初的dna變性步驟，*1體變性，聚合酶活性恢復(fù)。
pcr擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶 與非特異性擴(kuò)增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：一是引物與靶序列不完全互補(bǔ)、或引物聚合形成二聚體。二是mg2 離子濃度過(guò)高、退火溫度過(guò)低，pcr 緩沖液，及pcr循環(huán)次數(shù)過(guò)多有關(guān)。其次是酶的質(zhì)和量，往往一些來(lái)源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來(lái)源的酶則不出現(xiàn)，酶量過(guò)多有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。其對(duì)策有：必要時(shí)重新設(shè)計(jì)引 物。減低酶量或調(diào)換另一來(lái)源的酶。降低引物量，適當(dāng)增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點(diǎn)法（93℃變性，65℃左右退火與延伸）。
隨機(jī)引物擴(kuò)增技術(shù)(arbitrary primedpcr， ap- pcr)
ap-pcr技術(shù)通過(guò)隨意設(shè)計(jì)或選擇一個(gè)非特異性引物.在pcr反應(yīng)體系中.首先在不嚴(yán)格條件下使引物與模板中許多序列通過(guò)錯(cuò)配而復(fù)性。如果在兩條單鏈上相距一定距離有反向復(fù)性引物存在，則可經(jīng)taq酶的作用使引物延伸而發(fā)生dna部分片段的擴(kuò)增。經(jīng)一至數(shù)輪不嚴(yán)格條件下的pcr循環(huán)后，再于嚴(yán)格條件下進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)dna測(cè)序凝膠電泳分離后.經(jīng)放1射性自顯影或熒光顯示即可得到dna*圖。ap-pcr用于腫1瘤的**、**的分離;菌1種、菌株及不同物種的鑒定;遺傳作圖;不同分化程度或某些不同狀態(tài)下的組織的*表達(dá)差異等方面的研究。
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