HMy2CIR人B淋巴母細(xì)胞懸浮狀態(tài)

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 人b淋巴母細(xì)胞
細(xì)胞別稱 hmy2.cir; hmy.2 cir; hmy2.cir; c1r
細(xì)胞貨號 snl-011
細(xì)胞種屬 人
生長情況 懸浮
培養(yǎng)條件 imdm+10%fbs+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境 air, 95%; carbon dioxide (co2), 5%
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期 2-3天
培養(yǎng)基體積 t25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）
傳代方法 1. 混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；
2. 加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
3. 補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項(xiàng) 部分懸浮細(xì)胞會附著瓶底，輕輕晃動培養(yǎng)基或者吹打細(xì)胞面就會脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方 92%fbs+8%dmso(新手建議)或92%完全培養(yǎng)基+8%dmso(高手建議);
凍存規(guī)格 200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng) 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
tips：
1. 細(xì)胞懸浮生長，形態(tài)各異，偶有小聚團(tuán)，部分細(xì)胞附著瓶底；
2. 圓形透亮、細(xì)胞膜完整的細(xì)胞是活細(xì)胞，如果無法判斷，可以取少量細(xì)胞用臺盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)確定細(xì)胞活率；
3. 懸浮細(xì)胞密度維持1e5-5e5/ml之間，密度過低或者過高可能會影響細(xì)胞狀態(tài)；