武漢友名生物(多圖)-定量反轉(zhuǎn)錄*盒

pcr反應(yīng)特點
靈敏度高：pcr產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12）量級的起始待測模板擴增到微克（μg=-6）水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶1細(xì)胞；在病毒的檢測中，pcr的靈敏度可達(dá)3個rfu(空斑形成單位）；在*學(xué)中*小檢出率為3個*。
簡便、快速：pcr反應(yīng)用耐高溫的taq dna聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，定量反轉(zhuǎn)錄*盒，即在dna擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放1射性污染、易推廣。
純度要求低：不需要分離病毒或*及培養(yǎng)細(xì)胞，dna 粗制品及rna均可作為擴增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等dna擴增檢測。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（pcr）是一種用于放大擴增特定的dna部分片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊dna copy，pcr的*大特點是能將微量的dna大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇1殺案中兇1手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液，只要能分離出一丁點的dna，就能用pcr加以放大，進行比對。這也是“微量證據(jù)”的威力之所在。由1983年美國mullis首先提出設(shè)想，1985年由其發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)，即簡易dna擴增法，意味著pcr技術(shù)的*誕生。到如今2013年，pcr已發(fā)展到第三代技術(shù)。1976年，中國科學(xué)家錢嘉韻，發(fā)現(xiàn)了穩(wěn)定的taq dna聚合酶，為pcr技術(shù)發(fā)展也做出了基礎(chǔ)性貢獻。
pcr的創(chuàng)建
khorana (1971)等*早提出核酸體外擴增的設(shè)想：“經(jīng)dna變性，與合適的引物雜交，用dna聚合酶延伸引物，并不斷重復(fù)該過程便可合成trna*。”但由于當(dāng)時*序列分析方法尚未成熟，熱穩(wěn)定dna聚合酶尚未報道以及引物合成的困難，這種想法似乎沒有實際意義。加上分子克1隆技術(shù)的出現(xiàn)提供了一種克1隆和擴增*的途徑，所以khorana的設(shè)想被人們遺忘了。
1983年4月的一個星期五晚上，他開車去鄉(xiāng)下別墅的路上，猛然閃現(xiàn)出“多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”的想法。
1983年12月，mullis用同位素標(biāo)記法看到了10個循環(huán)后的49 bp長度的第yi個pcr片段；
1985年，kary mullis在cetus公司工作期間，發(fā)明了pcr。mullis要合成dna引物來進行測序工作，卻常為沒有足夠多的模板dna而煩惱。
1985年10月25日申請了pcr的專1利，
1987年7月28日批準(zhǔn)（專1利號4，683，202 ），mullis是第yi個發(fā)明人；
1985年12月20日在science雜志上發(fā)表了第yi篇pcr的學(xué)術(shù)論1文，mullis是共同作者；
1986年5月，mullis在冷泉港實驗室做專題報告，全世界從此開始學(xué)習(xí)pcr的方法。
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