TwistDx公司重組酶聚合酶擴增技術（RPA）

twistdx 的重組酶聚合酶擴增（rpa）將徹底改變在資源有限的現場環境中擴增和檢測核酸的能力。rpa 技術原理rpa 體系的重點是重組酶，這些酶與寡核苷酸引物形成復合體，并使引物與雙鏈 dna 中的同源序列配對。單鏈 dna 結合（ssb）蛋白與被取代的 dna 鏈結合，并使形成的 d 環保持穩定。然后從引物啟動由聚合酶介導的 dna 擴增，但前提是存在靶標序列。一旦啟動，擴增反應將快速進行，因此開始時只需一點靶標 dna 拷貝數，高特異性 dna 擴增在數分鐘內即可達到可檢出水平。rpa 循環
rpa 的技術特點為什么選擇 rpa 方法?◇ 速度rpa 非?？焖?，在 37～42 °c 這一通常較適宜的反應溫度下，只需少量核酸分子即可在 3～10 分鐘（通常）內擴增至可檢出水平，但這將取決于靶標大小。在大部分情況下，只需要一個人即可在半小時內采集樣本、制備樣本、運行檢測并**結果，并且*專業培訓?！?靈敏度rpa 可檢測復合樣本中的單拷貝 dna 和 10 拷貝甚至較少 rna，而*預先純化核酸?！?特異性rpa 具有高度特異性，該技術可從可能含有數百納克來自多個不同物種的不相關復合基因組 dna（包括人 dna）的樣本中識別并擴增單個 dna 分子，抗干擾能力強?！蠛銣剡\行rpa 在恒定的低溫（37～42 °c 較適宜）下運行。對于某些應用，如果需要，即便體溫也可支持 rpa 擴增。該反應在偏離溫度及低溫設置下也表現穩健，即使在常規室溫 25 °c 下也將奏效，雖然反應速度會下降; 在此溫度下，只要此生物化學過程被正確配置，仍可在一小時內獲得結果。◇ 樣本容差rpa 對樣本類型的要求寬松，有時可直接檢測未經核酸純化的原始樣本，例如血液、鼻拭子或培養基。通常，只需采用基本的病原體裂解方法處理樣本以釋放核酸即可，例如熱處理或弱堿處理。每種檢測所需的較合適的樣本制備方法取決于病原體滴定度、是否存在抑制劑以及裂解要求等因素，并將需要設計到檢測程序中。rpa 對某些復合樣本類型的寬容性使該技術非常適合廣泛的現場實地應用?！?廣泛的適用性rpa 能夠方便地應用于任何 dna 或 rna 靶標，無序列偏好性，這一點對于 ngs 尤其重要。如果將逆轉錄酶添加到反應混合液中開發出了**高靈敏度的 rna 一步檢測法。◇ 多重檢測通過將多種引物同時添加到同一反應管中，單次 rpa 測試即可擴增和檢測多種不同的靶標?！?低設備成本rpa 僅需要基本的檢測設備，也就是說，較終用戶可以使用 rpa 技術開發出適合各種應用和環境的人性化診斷方法和試劑盒?！?靈活的試劑形態**反應組分能夠以穩定的干燥形態供貨，該形態易于運輸，且*冷藏即可儲存較多 12 個月（穩定性可能因用途不同而有變化，因此仍建議在冷藏條件下長期儲存），也能夠以pcr試劑較常見的液體形態供貨，該形態允許用戶針對特定的應用改變反應體積和組分比例?！?多種檢測形式rpa 可應用于各種檢測系統和儀器，包括實時熒光探針和夾心法等形式。
rpa 與 其他核酸擴增方法 pcr 及 lamp 的比較
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