快切酶-友名生物公司

dna限制性內(nèi)切酶酶切是一項(xiàng)基于dna限制性內(nèi)切酶的*工程技術(shù)，其基本原理是利用限制性內(nèi)切酶對(duì)dna上特定序列的識(shí)別，來(lái)確定切割位點(diǎn)并實(shí)現(xiàn)切割，從而獲得所需的特定序列。
生物體內(nèi)能識(shí)別并切割特異的雙鏈dna序列的一種內(nèi)切核酸酶。它是可以將外來(lái)的dna切斷的酶，即能夠限制異源dna的*并使之失去活力，但對(duì)自己的dna卻無(wú)損害作用，這樣可以保護(hù)細(xì)胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在dna分子內(nèi)部進(jìn)行的，故名限制性內(nèi)切酶（簡(jiǎn)稱限制酶）。
限制酶作為酶類，訣定其催化作用具有高1效性、專一性和作用條件溫和等特點(diǎn)。其中專一性的具體表現(xiàn)為:某種限制酶只能催化dna上特定序列特定位點(diǎn)的*二脂鍵水解，結(jié)果是使dna分子被分割成不同的dna部分片段。限制酶所識(shí)別的雙鏈dna上的序列具有“回文對(duì)稱”性質(zhì)，即無(wú)論是奇數(shù)個(gè)堿基還是偶數(shù)個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線，中心軸線兩側(cè)的雙鏈dna上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將dna的兩條鏈分別切開(kāi)時(shí)，即錯(cuò)位平切，產(chǎn)生的是黏性末端;當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)，快切酶，即平切，產(chǎn)生平末端。錯(cuò)位切的限制酶在*工程中比較會(huì)常使用到，因?yàn)榕c平末端相比較，黏性末端更有利于dna部分片段的連接。
dna部分片段的連接
dna部分片段通過(guò)用每一種限制性內(nèi)切酶過(guò)量消化底物dna而獲得。這些片段隨后用t4 dna連接酶連接( 5′末端濃度為0.1-1.0 μm)。連接的片段然后用同一種限制性內(nèi)切酶重切。僅當(dāng)3′和 5′末端都保留完整，連接反應(yīng)才會(huì)發(fā)生;而且只有那些識(shí)別位點(diǎn)完全恢復(fù)的分子才能被重切。切割后正常的帶型說(shuō)明3′和 5′末端都是完整的，而且準(zhǔn)備的酶樣品中檢測(cè)不到核酸外切酶和*酶。
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